土壤中速效磷的测定

（0.5mol/LNaHCO₃浸提-钼锑抗比色法）

用PH8.5的0.5M碳酸氢钠溶液，于温度25℃左右提取分离土壤速效磷。取一定量的提取液,控制显色中的硫酸的浓度为0.4N，钼酸铵的浓度为0.1%，以氯化亚锡为还原剂，使形成“磷钼兰”溶液。用比色计测定其兰色强度，然后于标准曲线上查找其相应的浓度，从而计算土壤中的速效磷的含量。
二、主要仪器

震荡机、分光光度计或光电比色计、天平（0.01g）、三角瓶（250ml）、容量瓶（50ml）、漏斗、无磷滤纸、移液管（10ml）。

1.0.5mol/L的NaHCO₃ （pH8.5）浸提液 称取化学纯NaHCO₃42.0g溶于800ml蒸馏水中，以4mol/L NaOH溶液调节pH至8.5（用pH计测定），然后稀释至1000ml，保存在试剂瓶中。如果贮存期超过1个月，是用时应重新调整pH。

2.无磷活性炭 将会活性炭先用1：1（V/V）的盐酸浸泡过夜，在布氏漏斗上抽滤，用蒸馏水冲洗多次至无Cl^-为止，在用0.5mol/L NaHCO₃溶液浸泡过夜，在布氏漏斗上抽滤，用蒸馏水洗尽NaHCO₃，检查至无磷为止，烘干备用。

3. 硫酸—钼酸铵试剂：
a.贮存液：称化学纯钼酸铵50.0克于800ml水中，微热溶解。另取化学纯浓硫酸（比重1.84）903ml，分次徐徐加入盛有2000ml水的3000ml三角瓶，并不断用玻棒搅拌，冷却后备用。
将钼酸铵溶液徐徐加入硫酸溶液中，并不断搅拌，稀至5000ml（用容量瓶稀释多次定容），摇匀，此溶液贮于紧塞的细口瓶中，放在暗处保存，其钼酸铵浓度为1%，硫酸浓度为6.5N。
b.使用液：使用时视其用量，将贮存液准确稀释5倍（即1份体积贮存液加4份体积水），摇匀，即可使用。 4.钼锑抗混合显色剂 称取1.50g抗坏血酸（左旋，旋光度+12～+22，分析纯）溶于100ml钼锑抗贮存液中，混匀。此试剂有效期为24h，宜用前配制，随配随用。

5. 标准磷溶液：准确称取经45℃烘干6小时分析纯KH2PO4 4.3936克于小烧杯中，用少量水溶解后，将溶液毫无损失地溶解洗入1000ml量瓶中，加入2ml浓硫酸，稀释至刻度，摇匀，即为1000PPm/ml标准磷溶液。再准确吸取此液25.00ml于500ml量瓶中，用0.5M NaHCO3稀释至刻度，摇匀，即为50PPm磷的标准溶液。将50PPm磷的标准溶液用0.5M
NaHCO3溶液准确稀释至50倍，即为1PPm磷的工作曲线标准磷溶液。每次使用前必需摇匀（不要长期保存）。。

6.磷标准曲线绘制 分别吸取50mg/L磷标准液0、1、2、3、4、5（ml）于50ml容量瓶中，各加入0.5mol/L的NaHCO₃浸提液1ml和钼锑抗显色剂5ml，除尽气泡后定容，充分摇匀，即为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mol/L的磷的系列标准液。30min后与待测液同时进行比色，读取吸光度值。再方格坐标纸上以吸光度值为纵坐标，磷mol/L为横坐标便绘制成磷标准曲线。

1.待测液的制备  称取通过1mm筛孔的风干土样5.00g置于250ml三角瓶中，加入一小勺无磷活性炭和0.5mol/L的NaHCO₃浸提液100ml，塞紧瓶塞，在震荡机上震荡30min，取出后立即用干燥漏斗和无磷滤纸过滤，滤液用另一只三角瓶盛接。同时作空白试验。

2.显色：分别用快速移液管吸取滤液5.00ml于20×180mm试管中，再加硫酸—钼酸铵使用液5.00ml，轻轻摇动，以驱除CO2（防止试液溅出），最后充分摇匀，加氯化亚锡溶液1滴，再摇匀，当室温在20℃左右显色10—15分钟，否则应延长至20—25分钟

3 测定  吸取滤液10ml（对含P₂O₅1%以下的样品吸取10ml，含磷高的可改为5ml或2ml，但必须用0.5mol/L的NaHCO₃补足至10ml），于50ml容量瓶中，加钼锑抗混合显色剂5ml，小心摇动。30min后，在721或722型分光光度计上用波长660nm（光电比色计用红色滤光片）比色，以空白液的吸收值为0，读出待测的吸光度值。

4.标准磷液的工作曲线的绘制：
用快速移液管准确按下表，用6只20×180mm试管配制系列标准液后，进行显色测定：
标准系列溶液浓度（PPm） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
0.5M NaHCO3毫升数 5 4 3 2 1 0
1PPm/ml标准磷液毫升数 0 1 2 3 4 5
分别加入硫酸—钼酸铵使用液5.00ml，充分摇匀，出去CO2，再逐个加入氯化亚锡溶液1滴，摇匀，与待测液一样的条件显色后进行比色测定，以消光值E值为纵坐标，浓度为横坐标作一直线，在操作正确的条件下，方格坐标纸上相应的点，应该连成一条直线

土壤速效磷（mg/L）=

式中：待测液mg/L——从标准曲线上查得待测液浓度；

待测液体积——50ml；

分取倍数——浸提液总体积（ml）为吸取浸出液体积（ml）的倍数（100/10）；

烘干土重——风干土重乘以水分系数。

（1）钼锑抗混合显色剂的加入量要准确。

（2）加入混合显色剂后，即产生大量的CO₂气体，由于容量瓶口小，CO₂气体不易逸出，在混匀的过程中易造成试液外溢，造成测定误差，因此必须小心慢慢加入，同时充分摇动排出CO₂，以避免CO₂的存在影响比色结果。

（3）要求每天做一次工作曲线。当更换操作人员、试剂、光电比色剂的硒光电池，灯泡和电源时，都应重作工作曲线。每批样品做1—2个参比土样，以检验分析结果可靠程度。

（4）此法温度影响很大，一般测定应在20~25℃的温度下进行。如室温低于20℃，可将容量瓶放在30~40℃的热水中保温20min，取出冷却后进行比色。

 

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